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主營產(chǎn)品： 安拓思納米技術(shù)(蘇州)有限公司專注于納米制劑技術(shù),生物工程技術(shù),納米化工技術(shù)。供應(yīng)的設(shè)備包括微射流,熱熔擠出器,高壓均質(zhì)機(jī),脂質(zhì)體擠出器,細(xì)胞破碎機(jī)等。目前在國內(nèi)外的用戶數(shù)量超過1000個(gè)。
成功案例

ATS細(xì)胞裂解儀—腺相關(guān)病毒制備專用

什么是腺相關(guān)病毒

       腺相關(guān)病毒屬于微小病毒科依賴病毒屬，是目前已知的一類結(jié)構(gòu)最簡單的無包膜單鏈DNA缺陷型病毒。直徑約25nm, 由蛋白衣殼和長度為4.7kb的單鏈DNA基因組構(gòu)成，基因組兩端為兩個(gè)T型的末端反向重復(fù)序列（ITR），是病毒DNA復(fù)制的起點(diǎn)和觸發(fā)包裝的信號(hào)，基因組的REP基因與AAV復(fù)制有關(guān)，目前所使用的AAV載體均刪除REP基因，使基因組整合的可能性大大降低。已發(fā)現(xiàn)12種AAV血清型和100多種AAV突變體，不同血清型對(duì)組織和器官的親和性不同。而且AAV具有安全性高、免疫原性低、病毒滴度高等優(yōu)點(diǎn)，是安全級(jí)別最高RG1級(jí)的基因治療載體，被認(rèn)為是“最有前景的基因治療載體”。

 

圖：AAV載體顆粒

腺相關(guān)病毒制備

       AVV的生產(chǎn)流程跟抗體、疫苗類藥物的生產(chǎn)類似，主要包含上游培養(yǎng)、下游純化以及制劑部分。AAV基因療法下游處理可以占AAV生產(chǎn)生產(chǎn)總成本的很大一部分，后續(xù)對(duì)細(xì)胞裂解、過濾、純化等步奏具有很大的挑戰(zhàn)。

  圖：AAV載體生產(chǎn)流程

? 純化第一步——細(xì)胞裂解

傳統(tǒng)的細(xì)胞裂解有以下幾種方式：

A.反復(fù)冷凍、解凍再進(jìn)行低速離心的方法，此方法擴(kuò)大規(guī)模，不適合商業(yè)化生產(chǎn)；

B.采用triton-100表面活性劑進(jìn)行裂解，此方法在生產(chǎn)過程中相對(duì)成本較高，而且降解后產(chǎn)物對(duì)環(huán)境的影響不容小視，未來會(huì)將限制使用；

C.采用超聲波進(jìn)行高頻振蕩空穴效應(yīng)進(jìn)行破碎，但是在將來很難放大到GMP工廠使用；

所以行業(yè)類一般偏向于使用化學(xué)裂解方法來擴(kuò)大規(guī)模。AAV基因療法在將來產(chǎn)能放大的要求下，產(chǎn)品的工藝放大的可放大性，產(chǎn)品穩(wěn)定性等問題至關(guān)重要。

? 項(xiàng)目難點(diǎn)

A.傳統(tǒng)細(xì)胞裂解后，產(chǎn)品粘度高，均一性差、過濾性差；

B.AAV生產(chǎn)過程中必須實(shí)現(xiàn)無菌要求，增大生產(chǎn)難度； 

ATS細(xì)胞裂解儀

?ATS細(xì)胞裂解儀優(yōu)勢(shì)：

A.操作簡單化，易于使用

B.可無菌裂解

C.專用的裂解工藝，可平行放大

 

 ?ATS細(xì)胞裂解儀技術(shù)解讀： 

  • 通過壓力釋放空穴爆破的方式將細(xì)胞破碎，破碎效率高，采用純物理的方法破碎細(xì)胞，不用引入其他化學(xué)試劑，可提高病毒的滴度。

  • 破碎過程中全程低溫控制，可以保證樣品的活性。

  • 破碎細(xì)胞的同時(shí)可以將樣品中的核酸均質(zhì)打斷，降低破碎后樣品的粘度，有利于后續(xù)的樣品分離純化。

  • 設(shè)備可以在線SIP, 樣品破碎過程中可不會(huì)染菌。